H. pustulata Hook (Rubiáceas) se conoce como una planta tóxica porque ocasiona ceguera (queratoconjuntivitis) y dermatitis en el ganado. Hansen y Martiarena establecieron que su toxicidad se trata de una reacción de fotosensibilización, pero no lograron determinar los compuestos químicos responsables de este efecto. Nuestro estudio químico arroja la presencia mayoritaria de antraquinonas (AQs), las cuales han sido informadas en eventos anteriores.
Se utilizó el bioensayo de Artemia Salina (BST) con los derivados antraquinónicos puros para averiguar cuáles de ellos son fotosensibilizantes.
Se ensayaron las siguientes AQs: 3-hidroxi-1-metoxiantraquinona-2-aldehído (AQ1), 1,3-dihidroxi-2-metilantraquinona (AQ2), 1,6-dihidroxi-2-metilantraquinona (AQ3), 3-hidroxi-1-metoxi-2-metilantraquinona (AQ4) y 6-hidroxi-1-metoxi-2-metilantraquinona (AQ5). Como fototoxina de referencia se usó a-tertienilo (a-T). El experimento se llevo a cabo en concentraciones de 10, 1, 0.1 y 0.01 ppm por triplicado, preparándose dos grupos de muestras para cada compuesto. Uno se irradió 4 hs. con luz UV (200-340 nm) y se dejo 20 hs. bajo luz natural; mientras el otro se protegió durante las 24 hs. Se calculó la DL50 del a-T en oscuridad (1.9 ± 0.1 mg/ml) y bajo irradiación UV (0.08 ± 0.04 mg/ml).
Según los resultados obtenidos, AQ2 es la única que aumenta su actividad contra A. salina cuando es irradiada con luz UV. Sin embargo, no resulto ser tan potente como el a-T. A pesar que no se pudo calcular su DL50 por problemas de disolución, el BST fue útil como un ensayo preliminar para determinar que probablemente 1,3-dihidroxi-2-metilantraquinona es una de las responsables de la toxicidad de esta planta.