Gene discovery en erl insecto vector Triatoma infestans

AVILA ML, STROPPA, MM, GEREZ DE BURGOS NM, TEKIEL V Y SANCHEZ DO

Santa FÉ (Argentina)

Congreso; XXIV Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Protozoología; 2009

Sociedad Argentina de Protozoología

Avila ML1, Stroppa MM2, Gerez de Burgos N2, Tekiel V1, Sánchez DO1 1 Instituto de Investigaciones Biotecnológicas - UNSAM - CONICET; 2 Cátedra de Bioquímica y Biología Molecular, Facultad de Ciencias Médicas, UNC. E-mail: mlavila@iib.unsam.edu.ar El objetivo principal de nuestro proyecto es contribuir al descubrimiento de nuevos genes de T. infestans con la idea de generar información que pueda ser de utilidad para desarrollar nuevas estrategias de control de este vector, uno de los más importantes de la Enfermedad de Chagas en Argentina. Para ello estamos generando ESTs [Expressed Sequence Tags, (secuencias parciales de mRNAs)] a partir de distintos tejidos y estadíos del vector. Hasta el momento hemos construido 6 bibliotecas de ADNc diferentes y obtenido un total de 1738 ESTs. Las bibliotecas fueron construidas a partir de ARNm extraído de (i) ninfas de 4to estadio; (ii) intestino y (iii) músculo de insectos adultos. Tres de las bibliotecas se construyeron usando kits comerciales para favorecer el clonado de ARNm completos o el incremento de transcriptos de baja abundancia. Dos se construyeron usando la técnica de ORESTES que incrementa el clonado de la región central de los transcriptos y la restante se construyó digiriendo el ADN copia con una enzima de alta frecuencia y clonando en pGemT-easy. Las secuencias obtenidas fueron comparadas, usando el programa BlastX, con la base de datos de proteínas ?nr? del NCBI mediante la herramienta NetBlast. El 38,8% de las mismas presentaron similitud significativa (E value < 1e-10) con proteínas presentes en la base de datos. El ensamble de este grupo de secuencias generó un total de 89 contigs y 92 singlets; 125 de las cuales (contigs + singlets) presentaron similitud significativa con proteínas de otros organismos (no triatomíneos), representando nuevos genes para T. infestans. Por otra parte, 1094 secuencias (62,9%) no dieron similitud significativa, por lo que un porcentaje de las mismas puede representar nuevos genes no descriptos hasta el presente. Recientemente hemos implementado una estrategia alternativa a los ESTs para descubrir nuevos genes, que consiste en generar GSSs [Genome Sequence Survey, (secuencias de ADN al azar)]. Para ello estamos construyendo mini-bibliotecas de ADN genómico usando enzimas de restricción de corte frecuente. Hasta el momento hemos secuenciado 63 clones. El 19% de los GSSs obtenidos presentan similitud significativa con proteínas de otros organismos. Agradecemos al Biólogo Raúl L. Stariolo del Centro de Referencia de Vectores de Córdoba, Argentina por proveernos ejemplares de T. infestans. estadíos