Resumen:
ZEB1 (Zinc Finger E-box binding Homeobox) factor de transcripción
involucrado en la diferenciación celular, EMT y metástasis
se presenta bajo dos formas hiper e hipofosforiladas. Nuestro
objetivo fue determinar qué vía/s de señalización intracelular estarían
involucradas en la fosforilación de la región aminoterminal
de ZEB1 (N-ZEB1) y cómo eso repercute en su localización subcelular.
Se realizaron ensayos de inmunoprecipitación de N-ZEB1
en células HEK293T previamente tranfectadas con un clon que
expresa dicha región y posterior Western Blot revelado con diferentes
anticuerpos anti-fosfosustrato específicos, lo cual mostró
que N-ZEB1 es modificado postraduccionalmente por fosforilación
y las vías de señalización involucradas serían PI3K(AKT), MAPK
y PKC. Para estudiar la localización subcelular de N-ZEB1 se
realizó microscopia de fluorescencia en células CHO-K1 tranfectadas
con dos clones de dicha región fusionados a GFP, eGFPZ1
y eGFPZ2 (incluido en el anterior) y posteriormente tratadas con
diferentes activadores e inhibidores de vías. Los tratamientos con
PD98095, CalC, LY294002 y NVP-AEW541 (inhibidores de MEK/
ERK, PKC, PI3K e IGF1 respectivamente) mantuvieron la señal GFP con localización nuclear tanto en controles como en ambos
clones. El tratamiento con PMA/Iomicina (activador de PKC) reveló
una fuerte señal citosólica en ambos clones, en tanto que el
tratamiento con IGF1 repitió ese comportamiento sólo en el clon
eGFPZ1. El clon eGFPZ2 no fue respondedor a IGF-1. Estos
resultados sugieren que el cambio de estado de fosforilación de
la región N-ZEB1 induce cambios en su localización subcelular
y que las vías de señalización involucradas serían PKC e IGF1
en eGFPZ1 y PKC en eGFPZ2. Múltiples vías se señalización
parecen estar involucradas en la fosforilación de N-ZEB1, sin
embargo la fosforilación inducida por las vías de IGF1 y PKC
contribuirían en el rol biológico de ZEB1 mediante un cambio de
localización subcelular.