Aplicación del ELISA para la detección de amplicones de la secuencia génica IS6110 del Mycobacterium bovis

ANA CISLAGHI; DANA PEDROTTI; SILVIA FABIANO; ADRIANA SOUTULLO

Tandil - Buenos Aires - Argentina

Jornada; II Jornada Internacional y VIII Jornada y Reunión Anual de la AAIV; 2015

Asociación Argentina de Inmunología Veterinaria

El método de diagnóstico de Tuberculosis bovina másempleado para certificación oficial de rodeos es laprueba intradérmica de tuberculina (PPD), de baja sensibilidady subjetividad en su interpretación. Surge asíla necesidad de disponer de nuevas herramientas diagnósticaspara la detección del Mycobacterium bovis entanques de leche. A tal fin, la amplificación de la secuenciagénica de inserción IS6110 mediante PCR ha permitidodetectar, con elevada sensibilidad, presencia bacterianaen leche de tanque. Con el propósito de mejorardicha metodología modificamos la estrategia diagnóstica,aplicando la técnica ELISA para la detección de losproductos amplificados. Se emplearon cebadores marcadoscon biotina (BIO) y digoxigenina (DIG). La BIO seune a la estreptavidina inmovilizada en la superficie dela placa y la molécula de DIG, asociada al otro extremo,es reconocida por un anticuerpo anti-DIG conjugado auna peroxidasa, la que cataliza una reacción de color,en virtud de la presencia de M. bovis.