Propiedades Mecánicas de Membranas de Esferoplasto utilizando Pinzas Ópticas

COLQUE CLAUDIA ANTONELLA; GONZALEZ MONTORO M. AYELÉN; VALDEZ TAUBAS JAVIER; WILKE NATALIA

Córdoba

Jornada; Sextas Jornadas de Posgrado de la Facultad de Ciencias Químicas; 2013

La técnica de pinzas láser acoplada a microscopía óptica ha sido utilizada como método activo de determinación de la reología de modelos artificiales de membrana1 y de membrana plasmática de células de mamífero2. En este trabajo, ampliamos el uso de ésta técnica para estudiar la deformabilidad de la membrana plasmática de levadura de Saccharomyces cerevisiae. Esta membrana presenta propiedades difusionales muy diferentes a las de células de mamífero3, pero no existen reportes sobre su deformabilidad. Para realizar estos estudios se utilizaron esferoplastos, células de S. cerevisiae a las cuales se les digirió la pared celular por acción de la enzima zymoliasa, para descartar la rigidez proporcionada por la pared celular. La suspensión de esferoplastos se dispersó sobre un vidrio previamente lavado con solución piraña y recubierto con polilisina en buffer borato. Luego se agregaron micro-esferas de poliestireno con superficie aniónica (grupos SO3-) o catiónica (recubiertas con aminas) de 3 o de 1 µm de diámetro y se dejaron en contacto media hora de forma tal que un cierto porcentaje de micro-esferas se adhiera a la superficie del esferoplasto. Los experimentos se realizaron fijando la micro-esfera y moviendo el esferoplasto atrapado en la trampa óptica o viceversa, de forma tal de generar un nanotubo de membrana entre ellos. Una vez generado el nanotubo que mantiene unido el esferoplasto con la micro-esfera, la trampa se apagó y se estudió la velocidad de relajación de la membrana siguiendo la posición de la micro-esfera respecto del esferoplasto en el tiempo. Las curvas se analizaron considerando la fuerza elástica de la membrana que tiende a acortar el largo del nanotubo y a las fuerzas viscosas debido al medio acuoso y a la viscosidad de la membrana que se oponen al movimiento. Los experimentos indican que la membrana de esferoplasto tendría un comportamiento más elástico que la membrana de células de mamífero.