Heterophyllaea pustulata Hook. f. (Rubiáceas) es un arbusto que habita en el NO argentino, sobre la Cordillera de Los Andes entre los 2500 y 3000 m. s. m. Se conoce popularmente como cegadera, en referencia a la pérdida de visión que provoca en los animales que la ingieren y se exponen directamente a la luz solar [1]. A partir de las hojas y tallos de esta especie vegetal fueron aisladas e identificadas nueve antraquinonas (AQs) mayoritarias: soranjidiol, 1-metil éter de soranjidiol, rubiadina, 1-metil éter de rubiadina, damnacantal, damnacantol, heterofilina, pustulina y 5,5-bisoranjidiol [2]. Se ha demostrado previamente que éstos derivados son agentes fotosensibilizantes (FS) Tipo I y/o Tipo II, con generación de anión superóxido (O2.-) y/o oxígeno singlete (1O2), respectivamente. Numerosos FS fotodinámicos naturales han resultado bioactivos y con potencial aplicación como antimicrobianos en la terapia fotodinámica antimicrobiana (TFDA). La TFDA implica el uso de FS y luz visible o ultravioleta, que promueve la generación de especies reactivas del oxígeno (ERO), tales como O2.- y/o 1O2, induciendo daño celular que conlleva a la muerte de los microorganismos, revirtiendo la infección [3].
En esta oportunidad se evaluó la actividad antibacteriana de estas AQs midiendo la concentración inhibitoria mínima (CIM) mediante el método de macrodilución en caldo [4], sobre distintas bacterias Gram positivas: Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Staphylococcus epidermidis 688 y Enterococcus faecalis ATCC 29212.
Para los compuestos que mostraron actividad antibacteriana, se procedió a evaluar, si el mecanismo de acción involucra un aumento en los niveles de O2.- y si este efecto es potenciado en presencia de luz. La producción de O2.- se determinó, tanto en oscuridad como bajo irradiación actínica (380-480 nm), mediante un ensayo fotobiológico indirecto [5], que evalúa la reducción de Nitroblue Tetrazolium (NBT) a azul de formazán, por acción del O2.- producido por las bacterias en presencia de un agente oxidante (AQs). La suspensión bacteriana se incubó con cada AQ y NBT (0,1 % P/V) a 37 ºC, por triplicado y a distintos tiempos. Se midió la absorbancia del azul de formazán generado en el interior de las bacterias por espectrofotometría UV-Visible (λ= 575 nm).
Según los resultados obtenidos, rubiadina y soranjidiol poseen una CIM entre 125 y 250 µg/ml sobre las tres bacterias probadas y 1-metil éter de rubiadina sólo mostró inhibición sobre Staphylococcus epidermidis ATCC 12228 con una CIM de 125 µg/ml.
Respecto a la producción de O2.- se pudo observar que, a excepción de rubiadina en S. epidermidis 688, para todos los casos ensayados hubo un incremento en la producción de esta ERO y la producción fue mayor en condiciones de irradiación.
En base a los resultados mencionados, se puede considerar el uso de estas AQs como potenciales candidatos para la TFDA.
Bibliografía:
[1] Aguirre D.H.; Neumann R.A. - Med. Vet. 18, 487-490, 2001.
[2] Núñez Montoya S.C.; Agnese A.M.; Cabrera J.L. - Nat. Prod. J. 69, 801-803, 2006.
[3] Comini L.R.; Núñez S.C.; Sarmiento M.; Cabrera J.L.; Argüello G.A. - J. Photochem. Photobiol. A. Chem. 188, 185-191, 2007.
[4] Ferraro M. - Methods for dilution susceptibility tests for bacteria that grow aerobically, fifth ed., Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI). 2005.
[5] Carbonare M.D.; Pathak M.A. - J. Photochem. Photobiol. B: Biol. 14, 105-124, 1992.
