DISEÑO DE UN INMUNO-ENSAYO PLASMÓNICO LIBRE DE ENZIMAS: APLICACIONES EN BIO-MEDICINA Y CIENCIAS DE LOS ALIMENTOS

Bariloche

Workshop; Workshop Fotobiología en Nanosistemas; 2018

Centro Regional Universitario Bariloche de la Universidad Nacional del Comauhe Quintral

Una de las principales estrategias utilizadas en medicina como herramienta dediagnóstico para la detección y cuantificación de antígenos en una muestra, es el ensayo por inmunoabsorción ligado a enzimas o enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). ELISA utiliza el concepto básico de inmunología de la unión de un antígeno a su anticuerpo específico, lo que permite la detección de cantidades muy pequeñas de antígenos en un fluido. La metodología ELISA posee ciertas limitaciones debido a la unión no específica del antígeno a la placa de captura del mismo o a la reacción de cambio de color mediada por enzimas, que puede conducir a falsos positivos. Además, esta técnica utiliza grandescantidades de reactivos en el proceso de inmovilización en la placa, y requiere varios pasos de lavado que consumen mucho tiempo. Por lo tanto, existe la necesidad de desarrollar plataformas precisas y capaces de efectuar una cuantificación rápida y específica de antígenos.En esta presentación, desarrollaremos las bases teórico-experimentales de unatécnica óptica desarrollada recientemente en nuestros laboratorios para la detección y cuantificación rápida de antígenos en muestras reales llamada IDILA (Intensity Depletion Immuno-Linked Assay) para la cuantificación rápida y específica de antígenos en dispersiones coloidales de nanopartículas (NPs) de Ag funcionalizadas con biotina (Biot) y streptavidina (STV) sin usar enzimas. Mostraremos que esta metodología permite la detección de antígenos en cantidades femto-molares y su aplicación para la detección temprana de artritis reumatoidea y de gliadina (gluten) de relevancia en ciencia de los alimentos para el control de la enfermedad celíaca. El IDILA se basa en el cambio en la respuesta óptica de una dispersión coloidal de NPs de Ag al formar dimeros, en presencia yen ausencia del antígeno, producidos por la interacción STV-Biot biotina, en combinación con la capacidad de reconocimiento biomolecular específica de las inmunoglobulinas (IgG) biotiniladas. Dependiendo de las condiciones experimentales IDILA posee límites de detección 10000-10000 veces menores que el ELISA, siendo más rápido (2 hs), económico y utiliza los equipos estándar usados en los laboratorios convencionales.