CAPACIDAD ADYUVANTE DE LIGANDOS DE TLR7 SOBRE LA RESPUESTA HUMORAL Y LA PRESENTACIÓN CRUZADA DE ANTÍGENOS EN CÉLULAS DENDRÍTICAS

CRESPO MI; ESTEFANÍA R. ZACCA; B. MALETTO; M. C. PISTORESI; G. MORON

Mar del Plata

Congreso; LVII Reunión Científica de la Sociedad Argentina de Inmunología.; 2009

SAI

Previamente mostramos que células dendríticas de bazo de ratones C57BL/6 (DCs) estimuladas con ligandos de TLR7 aumentan su capacidad de realizar presentación cruzada de antígenos (Ag) in vitro y tienen capacidad adyuvante en la inducción de respuesta CTL. Para evaluar el efecto de PolyU (ligando TLR7) sobre la respuesta humoral, se inmunizaron ratones en el día 0 y 21 con OVA junto a PolyU estabilizado con DOTAP (PolyU/DO). En el día 28 se determinaron los niveles séricos de IgG1 e IgG2a específicos. En ratones inmunizados con PolyU/DO+OVA el título (log10) de IgG1 fue 5,71±0,01 y el de IgG2a fue 5,3±0,2 mientras que en los inmunizados con DOTAP+OVA fue de 5,31±0,01 y 2,00±0,01 respectivamente (p<0,0001). Para dilucidar el mecanismo por el cual PolyU actúa, DCs estimuladas in vitro con PolyU/DO+OVA y preincubadas con diferentes inhibidores, se cocultivaron con linfocitos T CD8 de ratones OT-I. Luego de 3 días se evaluó activación y proliferación de linfocitos por dilución de CFSE y secreción de IFNγ en los sobrenadantes de cultivo por ELISA. En ausencia de inhibidores un 78% de las células T estaban proliferando (5% con DCs sin estimular). En presencia de Exotoxina A (inhibidor de Sec61, posible responsable de la salida de Ag del endosoma al citosol), un 34% estaban en proliferación. En presencia de Lactacistina, inhibidor de proteosoma, no hubo proliferación. En presencia de IRS661, antagonista del TLR7, un 30% estaban en proliferación. Estos resultados se correlacionaron con la expresión de CD25 y la secreción de IFNγ. En conclusión, el PolyU tiene capacidad adyuvante sobre la respuesta humoral y sobre la presentación cruzada de OVA en DCs. La misma estaría mediada principalmente por estimulación del TLR7. En el procesamiento de OVA en DCs estimuladas con PolyU la proteína Sec61 y el proteasoma jugarían un rol determinante sobre la presentación cruzada de Ag.