AISLAMIENTO DE FRACCIONES CON ACTIVIDAD ANTI-TIROSINASA DE UN EXTRACTO DE LEPECHINIA MEYENII

MARÍA INÉS CRESPO; MACARENA FUNES CHABÁN; MARIANA BELÉN JORAY; SARA MARÍA PALACIOS ; MARÍA CECILIA CARPINELLA

Simposio; IX SIMPOSIO INTERNACIONAL DE QUIMICA DE PRODUCTOS NATURALES Y SUS APLICACIONES; 2016

La enzima tirosinasa (EC 1.14.18.1), también llamada polifenoloxidasa, es una metaloproteína contenedora de iones cobre en su sitio activo ampliamente distribuida en mamíferos, artrópodos, plantas y microorganismos. Dicha enzima cataliza las dos primeras reacciones en la biosíntesis de melanina: la hidroxilación de L-tirosina a L-DOPA (actividad monofenolasa) y la posterior oxidación de esta última a dopaquinona (actividad difenolasa). En humanos la presencia de melanina es fundamental para la protección de la radiación UV y remoción de especies reactivas de oxígeno. Sin embargo, su acumulación deriva en patologías de hiperpigmentación (por sobre-expresión de la enzima) como manchas, pecas, melasma y melanoma maligno. La inhibición de tirosinasa resulta ser entonces una importante estrategia para el tratamiento de estas enfermedades, como así también para el control de insectos y microorganismos y como aditivos alimenticios que eviten el pardeamiento enzimático de frutas, verduras y crustáceos.El hecho de encontrar descriptas en la bibliografía diversas moléculas con capacidad inhibidora de tirosinasa obtenidas a partir de plantas, incentivó a que en nuestro laboratorio se buscaran compuestos activos en extractos etanólicos de 92 especies nativas del centro de Argentina recogidas en las sierras de Córdoba. Para esto se realizó un screening de actividad utilizando la técnica de dopacromo, el cual demostró que Lepechinia meyenii poseía una marcada propiedad inhibitoria de la actividad monofenolasa de la enzima con una IC50 de 10,43 μg/ml(1).Con el objetivo de poder elucidar la estructura molecular del o de los principios activos, se realizó un aislamiento bioguiado a partir del extracto etanólico de Lepechinia meyenii. Para ello se realizaron fraccionamientos cromatográficos sucesivos utilizando columnas con sílica gel. Como fase móvil se utilizaron los siguientes solventes, puros o en mezclas binarias, en orden creciente de polaridad: hexano, éter etílico, acetato de etilo y metanol. La actividad de las fracciones obtenidas fue evaluada a 50 y 25 μg/ml mediante la técnica de dopacromo. Al comenzar con el aislamiento se observó que varias de las fracciones obtenidas presentaban más del 90 % de inhibición de la actividad de tirosinasa, aun cuando las mismas tuvieran perfiles diferentes en TLC. Una de las fracciones activas (A) fue eluída con la mezcla hexano/éter etílico 30:70, mientras que otras dos (B y C) fueron eluídas con mezclas de solventes más polares, éter etílico/acetato de etilo 50:50 o acetato de etilo/metanol 60:40, respectivamente.Para identificar cuál de los compuestos presentes en A era el que poseía actividad anti-tirosinasa, se realizó una TLC con cloroformo/éter etílico 70:30 como fase móvil y se evaluó la actividad de la enzima sobre la placa cromatográfica. De esta manera se identificó un compuesto con un Rf=0,47, visible con lámpara UV 365 nm. Un estudio preliminar en HPLC utilizando acetonitrilo/agua 60:40 como fase móvil, mostró que el compuesto activo se podría corresponder a un pico con un tiempo de retención de 5,80 min. visualizado a 210 nm. En el caso de C, los resultados preliminares de comparaciones con testigos y datos bibliográficos sugerirían que podría ser un derivado del ácido cafeico. Los resultados obtenidos hasta el momento muestran que el extracto de Lepechinia meyenii posee al menos tres compuestos activos diferentes y su elucidación molecular permitirá proponer a estos metabolitos como posibles nuevos agentes terapéuticos y cosméticos.(1) M.E. Chiari, M.B. Joray, G. Ruiz, S.M. Palacios, M.C. Carpinella. Food Chemistry 120 (2010) 10?14.