LOS BACULOVIRUS UTILIZAN TLR9 PARA ACTUAR COMO VECTORES DE INMUNIZACIÓN Y GENERAR UNA RESPUESTA CITOTÓXICA CONTRA LOS ANTÍGENOS EXPRESADOS EN SU CÁPSIDE.

CRESPO, MARÍA INÉS; MOLINARI, PAULA ; MOLINA GUIDO; TABOGA OSCAR; MORON GABRIEL

Congreso; II CONGRESO CIENTÍFICO PROFESIONAL DE BIOQUÍMICA; 2019

INTRODUCCIÓN: Los BV son una familia de virus envueltos con genomas de ADN doble cadena, patógenos exclusivamente para insectos. No existe ningún reporte de su patogenicidad en vertebrados. Previamente mostramos que BV expresando Ag exógenos en su cápside (BVOVA) inducen una fuerte respuesta citotóxica Ag específica in vivo. Los BV ingresan íntegros a compartimentos subcelulares de células dendríticas (DC) y tras un proceso de acidificación mediado por vesículas lisosomales, la cápside viral alcanza el citoplasma.OBJETIVO: Estudiar el mecanismo por el cual los BV estimulan DC para activar linfocitos T citotóxicos (CTL).MATERIALES Y MÉTODOS: DC esplénicas de ratones C57BL/6 estimuladas con BVOVA fueron incubadas con el hibridoma de células T CD8 B3Z específico para OVA257-264, para evaluar la presentación de Ag mediada por MHC I. Para estudiar la respuesta CTL in vivo, se inmunizaron ratones vía i.v. con BVOVA. Análisis estadístico: t student.RESULTADOS: La neutralización de la proteína de fusión GP64 de la envoltura del BV con un anticuerpo monoclonal inhibió su capacidad de estimular en DC la activación de LT CD8 in vitro (p<0,01). Dicha activación también fue inhibida cuando las DC fueron tratadas con cloroquina (inhibidor de acidificación endosomal) (p<0,05) o lactacistina (inhibidor de proteosoma) (p<0,01). Estos resultados concuerdan con los obtenidos previamente por microscopía. La respuesta de CTL en ratones deficientes en TLR9 inmunizados con BVOVA fue menor que la de ratones wt (p<0,001). Ratones deficientes en el receptor de IFN tipo I pueden desarrollar una respuesta CTL normal (p>0,05). CONCLUSIÓN: Los BV requieren la maduración de los endosomas y la presencia de TLR9 en las DC para generar CTL. La proteína de fusión GP64 mediaría el escape de los BV al citoplasma dentro de las DC. Allí los BV son procesados por el proteosoma para entrar en la vía de presentación MHC I. La generación de CTL mediada por BV no requiere la participación de los IFN tipo I.