Introducción
Candida albicans es el principal patógeno fúngico aislado en humanos, causando un gran número de infecciones intrahospitalarias. Muchas de éstas, están asociadas al uso de dispositivos biomédicos, tales como catéteres, sondas y dispositivos intrauterínos, donde Candida posee la capacidad de formar biofilms sobre la superficie. Estudios previos de nuestro grupo de trabajo han demostrado que el tratamiento de biofilms de C. albicans con macrófagos (MØ), por períodos de tiempos cortos, resulta en una modificación de la biomasa probablemente asociada al metabolismo oxidativo del mismo.
Objetivo
En el presente estudio, nuestro objetivo fue evaluar la presencia de diferentes metabolitos oxidativos en biofilms maduros de C. albicans expuestos a tratamientos prolongados con MØ, lo que podría estar relacionado con el nivel de biomasa presente en el sistema.
Materiales y métodos
*Modelo experimental: C. albicans fue incubada en microplacas de polipropileno de 96 pocillos por 48 hs para formar el biofilms maduro. Posteriormente, a este biofilms se le agregó Mø (línea celular de ratón -RAW-) o medio (RPMI). La determinación de biomasa, especies reactivas del oxigeno (ERO) y especies reactivas del nitrógeno (ERO) fue realizada luego de 24 hs de la co-incubación.
*Determinación de Biomasa: La biomasa fue cuantificada a través de la coloración con cristal violeta, y una Unidad de Biomasa de Biofilm (UBB) fue definida arbitrariamente como una densidad óptica de 0,1 leída a 595 nm (DO595) (1 UBB = 0,1 DO595).
*Especies Reactivas del Oxigeno y Nitrógeno: Las ERO fueron detectadas por reducción de Azul de Nitro Tetrazolio (NBT) a Azul de Formazán, mientras que la presencia de ERN (nitritos) fue evaluada mediante la técnica de Griess.
Resultados
La adición de MØ a los cultivos resultó en un incremento de la biomasa de biofilms maduro con respecto a los cultivos controles (RPMI). Además, este incremento en la formación de biofilms fue acompañada de una disminución en los niveles intra y extracelulares de ERO. En contraste, la producción de ERN en biofilms co-cultivados con MØ no fue significativamente modificada con respecto a la observada en cultivos sin tratamiento.
Conclusiones
Nuestros resultados muestran que el cultivo prolongado de biofilms maduros de C. albicans con MØ es capaz de incrementar significativamente la biomasa del mismo. Además, la presencia de estas células también induce una alteración en el metabolismo oxidativo del sistema, indicado por la disminución en los niveles de liberación de ERO observados. Por lo tanto, en este modelo in vitro, los MØ pueden interactuar con biofilms ya formados, aumentando su biomasa y modificando su balance oxidativo. No obstante, futuros estudios son necesarios para dilucidar el mecanismo por el cual estas células inducen estos fenómenos.
