BARONETTI JOSÉ LUIS
Congresos y reuniones científicas
Título:
Actividad anticoagulante de nanopartículas metálicas obtenidas por biosíntesis procariota
Autor/es:
QUINTEROS, MELISA A.; CRESPO, KARINA A.; PAEZ P; PARAJE, MG; BARONETTI JL
Reunión:
Congreso; XXIII Congreso Latinoamericano de Microbiología y XIV Congreso Argentino de Microbiología ALAM-CAM 2016, IV Congreso Latinoamericano de Microbiología de Medicamentos y Cosméticos ? CLAMME y la Reunión de la Sociedad Latinoamericana de Tuberculosis y Otras; 2016
Resumen:
Las nanopartículas (Nps) metálicas son de gran interés debido a su amplia aplicación en varios campos de la ciencia y tecnología. Dentro de
estas Nps, las biosintetizadas por microorganismos han adquirido una gran importancia debido a que son obtenidas por procesos naturales y
económicos. Numerosos microorganismos, tales como bacterias y hongos, se han utilizado para sintetizar estas partículas. Sin embargo, las
TRABAJOS CIENTÍFICOS
bacterias son de elección debido a su fácil cultivo y manipulación genética. Diferentes actividades biológicas como por ejemplo antimicrobianas
y antioxidantes han sido descriptas para Nps metálicas provenientes de bacterias. El objetivo de este trabajo fue evaluar la actividad
anticoagulante de Nps de Hierro (Fe) biosintetizadas a partir de Escherichia coli y Pseudomonas aeruginosa.
Para la biosíntesis intracelular de Nps se utilizó E. coli ATCC 25922 o P. aeruginosa ATCC 27853 las cuales fueron cultivadasen Caldo Tripteína
Soya durante 18 h 37 °C con agitación a 200 rpm. Se mezclaron 15 ml del cultivo anterior con 1,5 ml de la solución metálica (1 mM) y se incubó
en agitador (48 h‐37 °C). Luego, la solución se sonicó a 80W 30 min y se centrifugó a 8500 rpm 5 min. Para el estudio de la biosíntesis
extracelular se trabajó con el sobrenadante de los cultivos overnight. La identificación de las Nps se llevó a cabo por Espectrofotometría UV‐
visible realizando un barrido entre 200 y 800nm, observando el plasmón superficial de resonancia (SPR). Para determinar la actividad
anticoagulante de estas Nps, se determinó el Tiempo de protrombina (TP), Tiempo de Tromboplastina Parcial Activada (TTPA) y Tiempo de
trombina (TT) en plasmas obtenidos con citrato de sodio. Estos test son los utilizados con mayor frecuencia para evaluar este tipo de actividad,
pudiendo evaluar tanto la vía extrínseca (TP) como la intrínseca (TTPA).
Cuando se evaluó el TT, el agregado de Nps (2,4 mg/mL) a muestras de plasma resulto en un retraso en la formación del coagulo con respecto al
control (Solución Salina), indicando una actividad anticoagulante de las Nps. Para evaluar la vía de coagulación por la cual se produce este
efecto, las vías extrínseca e intrínseca fueron evaluadas. En este trabajo se observó que el tratamiento con las Nps alargó los tiempos de
formación del coagulo para la prueba TTPA, sin modificación de la prueba TP.
Los resultados demuestran la actividad anticoagulante de Nps de Fe biosintetizadas extracelularmente a partir de E. coli por una vía intrínseca
sin una aparente modificación de la vía extrínseca. Estos estudios contribuyen a la meta del probable uso de Nps provenientes de biosíntesis
para el tratamiento de diferentes patologías incluidas aquellas relacionadas a los trastornos de la coagulación.
estas Nps, las biosintetizadas por microorganismos han adquirido una gran importancia debido a que son obtenidas por procesos naturales y
económicos. Numerosos microorganismos, tales como bacterias y hongos, se han utilizado para sintetizar estas partículas. Sin embargo, las
TRABAJOS CIENTÍFICOS
bacterias son de elección debido a su fácil cultivo y manipulación genética. Diferentes actividades biológicas como por ejemplo antimicrobianas
y antioxidantes han sido descriptas para Nps metálicas provenientes de bacterias. El objetivo de este trabajo fue evaluar la actividad
anticoagulante de Nps de Hierro (Fe) biosintetizadas a partir de Escherichia coli y Pseudomonas aeruginosa.
Para la biosíntesis intracelular de Nps se utilizó E. coli ATCC 25922 o P. aeruginosa ATCC 27853 las cuales fueron cultivadasen Caldo Tripteína
Soya durante 18 h 37 °C con agitación a 200 rpm. Se mezclaron 15 ml del cultivo anterior con 1,5 ml de la solución metálica (1 mM) y se incubó
en agitador (48 h‐37 °C). Luego, la solución se sonicó a 80W 30 min y se centrifugó a 8500 rpm 5 min. Para el estudio de la biosíntesis
extracelular se trabajó con el sobrenadante de los cultivos overnight. La identificación de las Nps se llevó a cabo por Espectrofotometría UV‐
visible realizando un barrido entre 200 y 800nm, observando el plasmón superficial de resonancia (SPR). Para determinar la actividad
anticoagulante de estas Nps, se determinó el Tiempo de protrombina (TP), Tiempo de Tromboplastina Parcial Activada (TTPA) y Tiempo de
trombina (TT) en plasmas obtenidos con citrato de sodio. Estos test son los utilizados con mayor frecuencia para evaluar este tipo de actividad,
pudiendo evaluar tanto la vía extrínseca (TP) como la intrínseca (TTPA).
Cuando se evaluó el TT, el agregado de Nps (2,4 mg/mL) a muestras de plasma resulto en un retraso en la formación del coagulo con respecto al
control (Solución Salina), indicando una actividad anticoagulante de las Nps. Para evaluar la vía de coagulación por la cual se produce este
efecto, las vías extrínseca e intrínseca fueron evaluadas. En este trabajo se observó que el tratamiento con las Nps alargó los tiempos de
formación del coagulo para la prueba TTPA, sin modificación de la prueba TP.
Los resultados demuestran la actividad anticoagulante de Nps de Fe biosintetizadas extracelularmente a partir de E. coli por una vía intrínseca
sin una aparente modificación de la vía extrínseca. Estos estudios contribuyen a la meta del probable uso de Nps provenientes de biosíntesis
para el tratamiento de diferentes patologías incluidas aquellas relacionadas a los trastornos de la coagulación.
