Glucuronoxilomanano (GXM) es el componente mayoritario de la cápsula del hongo levaduriforme Cryptococcus
neoformans. Durante las infecciones este polisacárido es secretado por el hongo durante su replicación y es
retenido en macrófagos tisulares. En un modelo de criptococosis diseminada en ratas, observamos macrófagos
tisulares apoptóticos con GXM intracelular. El objetivo de este trabajo fue investigar si GXM induce apoptosis de
macrófagos (MÆ) de rata in vitro y los mecanismos asociados a este fenómeno. El GXM se obtuvo por
precipitación con etanol y CTAB a partir de un cultivo de levaduras. Ratas Wistar se inyectaron con tioglicolato al 4% y los macrófagos se purificaron de lavados peritoneales, utilizando un gradiente de percoll y adherencia. Las células obtenidas expresaban aproximadamente 95 % de CD11 b/c, 85% de MCH II, 60% de ED2 y eran negativas para marcadores linfocitarios. Los MÆ se cultivaron (1 x 106) durante 24 o 48 h con 50 o 200 mg de
GXM. Luego de 48 h de cultivo se observó que 200mg de GXM inducen un 30 % de incremento en la
hipodiploidía de MÆ (p < 0,00005 respecto a los controles; tinción con ioduro de propidio y citometría de flujo).
La apoptosis se confirmó con anexina V, reacción de TUNEL y retención mitocondrial de TMRE. Con el agregado de diferentes inhibidores a los cultivos se observó que aminoguanidina (AG, inhibidor de la iNOS) revertía totalmente la muerte celular inducida por GXM, demostrando la participación de óxido nítrico (NO) en este fenómeno. GXM inducía NO en macrófagos, de manera dosis dependiente (determinado por reacción de Griess) y 200mg de este polímero causaban una fuerte expresión de iNOS (por Western blot) a las 24 h de
cultivo (p < 0,000001, respecto a los controles). La inducción de NO por GXM fue dependiente de la fagocitosis y activación de proteínas kinasas C. Este es el primer reporte que muestra la capacidad de GXM para inducir óxido nítrico y su participación en la muerte celular de macrófagos.
precipitación con etanol y CTAB a partir de un cultivo de levaduras. Ratas Wistar se inyectaron con tioglicolato al
4% y los macrófagos se purificaron de lavados peritoneales, utilizando un gradiente de percoll y adherencia. Las
células obtenidas expresaban aproximadamente 95 % de CD11 b/c, 85% de MCH II, 60% de ED2 y eran
negativas para marcadores linfocitarios. Los MÆ se cultivaron (1 x 106) durante 24 o 48 h con 50 o 200 mg de
GXM. Luego de 48 h de cultivo se observó que 200mg de GXM inducen un 30 % de incremento en la
hipodiploidía de MÆ (p < 0,00005 respecto a los controles; tinción con ioduro de propidio y citometría de flujo).
La apoptosis se confirmó con anexina V, reacción de TUNEL y retención mitocondrial de TMRE. Con el agregado de diferentes inhibidores a los cultivos se observó que aminoguanidina (AG, inhibidor de la iNOS) revertía totalmente la muerte celular inducida por GXM, demostrando la participación de óxido nítrico (NO) en este fenómeno. GXM inducía NO en macrófagos, de manera dosis dependiente (determinado por reacción de Griess) y 200mg de este polímero causaban una fuerte expresión de iNOS (por Western blot) a las 24 h de
cultivo (p < 0,000001, respecto a los controles). La inducción de NO por GXM fue dependiente de la fagocitosis y activación de proteínas kinasas C. Este es el primer reporte que muestra la capacidad de GXM para inducir óxido nítrico y su participación en la muerte celular de macrófagos.
GXM. Luego de 48 h de cultivo se observó que 200mg de GXM inducen un 30 % de incremento en la
hipodiploidía de MÆ (p < 0,00005 respecto a los controles; tinción con ioduro de propidio y citometría de flujo).
La apoptosis se confirmó con anexina V, reacción de TUNEL y retención mitocondrial de TMRE. Con el agregado de diferentes inhibidores a los cultivos se observó que aminoguanidina (AG, inhibidor de la iNOS) revertía totalmente la muerte celular inducida por GXM, demostrando la participación de óxido nítrico (NO) en este fenómeno. GXM inducía NO en macrófagos, de manera dosis dependiente (determinado por reacción de Griess) y 200mg de este polímero causaban una fuerte expresión de iNOS (por Western blot) a las 24 h de
cultivo (p < 0,000001, respecto a los controles). La inducción de NO por GXM fue dependiente de la fagocitosis y activación de proteínas kinasas C. Este es el primer reporte que muestra la capacidad de GXM para inducir óxido nítrico y su participación en la muerte celular de macrófagos.
hipodiploidía de MÆ (p < 0,00005 respecto a los controles; tinción con ioduro de propidio y citometría de flujo).
La apoptosis se confirmó con anexina V, reacción de TUNEL y retención mitocondrial de TMRE. Con el agregado de diferentes inhibidores a los cultivos se observó que aminoguanidina (AG, inhibidor de la iNOS) revertía totalmente la muerte celular inducida por GXM, demostrando la participación de óxido nítrico (NO) en este fenómeno. GXM inducía NO en macrófagos, de manera dosis dependiente (determinado por reacción de Griess) y 200mg de este polímero causaban una fuerte expresión de iNOS (por Western blot) a las 24 h de
cultivo (p < 0,000001, respecto a los controles). La inducción de NO por GXM fue dependiente de la fagocitosis y activación de proteínas kinasas C. Este es el primer reporte que muestra la capacidad de GXM para inducir óxido nítrico y su participación en la muerte celular de macrófagos.
La apoptosis se confirmó con anexina V, reacción de TUNEL y retención mitocondrial de TMRE. Con el
agregado de diferentes inhibidores a los cultivos se observó que aminoguanidina (AG, inhibidor de la iNOS)
revertía totalmente la muerte celular inducida por GXM, demostrando la participación de óxido nítrico (NO) en
este fenómeno. GXM inducía NO en macrófagos, de manera dosis dependiente (determinado por reacción de
Griess) y 200mg de este polímero causaban una fuerte expresión de iNOS (por Western blot) a las 24 h de
cultivo (p < 0,000001, respecto a los controles). La inducción de NO por GXM fue dependiente de la fagocitosis y activación de proteínas kinasas C. Este es el primer reporte que muestra la capacidad de GXM para inducir óxido nítrico y su participación en la muerte celular de macrófagos.
cultivo (p < 0,000001, respecto a los controles). La inducción de NO por GXM fue dependiente de la fagocitosis y
activación de proteínas kinasas C. Este es el primer reporte que muestra la capacidad de GXM para inducir
óxido nítrico y su participación en la muerte celular de macrófagos.
