PARTICIPACIÓN DEL RECEPTOR AHR EN LA INMUNOTOXICIDAD INDUCIDA POR LAS MICOTOXINAS AFB1 Y FB1, EN FORMA INDIVIDUAL Y CONJUNTA.

MARY, VERÓNICA SOFÍA; VELEZ, PILAR ANDREA; RUBINSTEIN, HÉCTOR RAMÓN; THEUMER, MARTÍN GUSTAVO

Buenos Aires

Congreso; X Congreso AOAC Internacional: Sección Latinoamérica y el Caribe, CABA; 2018

SOCIEDAD LATINOAMERICANA DE MICOTOXICOLOGIA

La activación del receptor de hidrocarburo de arilo (Ahr) induce los sistemasmetabólicos, como el citocromo P450 1A (CYP1A), el cual es una de las principalesenzimas biotransformadoras de aflatoxina B1 (AFB1) en su metabolito altamentereactivo AFB1-exo-8,9-epóxido. Esta micotoxina se ha asociado con una alta incidenciade carcinoma hepatocelular. En este contexto, el objetivo de este trabajo fue elucidar laposible contribución de la activación del receptor Ahr en la toxicidad de AFB1 y FB1, enforma individual y combinadas, en células del sistema inmune.Métodos:Cultivo de células mononucleares de bazo (CMB): Las células fueron obtenidas deratones machos de las cepas C57BL/6 (wild type) y B6.D2N-Ahrd/J (backgroundC57BL/6, homocigota para el alelo Ahrd/Ahrd, el cual expresa un Ahr con baja afinidadpor sus ligandos). Las CMB fueron cultivadas con 0 - 50 µM de AFB1, 0 - 250 µM deFB1 o mezclas de ambas micotoxinas (MIX) (AFB1 5 µM + FB1 25 µM; AFB1 25 µM +FB1 125 µM; AFB1 50 µM + FB1 250 µM), por 24-72 h.Evaluación de la Citotoxicidad: Se realizó por ensayo colorimétrico mediante tincióncon 3-(4,5-dimetiltiazol-2-yl)-2,5- bromuro de difeniltetrazolium (MTT), y porcitometría de flujo utilizando una sonda (Succinimidyl Ester). Actividad de CYP1A: Se determinó mediante el ensayo EROD (7-ethoxyresorufin-O-deethylase), y se expresó como pmol resorufina/mg de proteína/min.Resultados: En las CMB de ambas cepas de ratones sólo se observaron aumentossignificativos en la actividad de CYP1A inducidos por AFB1, en forma individual yespecialmente en combinación con FB1, por 24 h. Sin embargo, los incrementosobservados en la cepa wild type fueron significativamente mayores a los encontrados enla cepa Ahrd/Ahrd. Por otra parte, en los ensayos de citotoxicidad se encontró que sóloAFB1, y sus combinaciones con FB1, afectaron la viabilidad celular de maneradependiente de la concentración, pero no se hallaron diferencias entre las CMB deambas cepas de ratones. Sin embargo, cuando se analizó específicamente la poblaciónde linfocitos T CD4+ se observó que AFB1, sola y principalmente en conjunto con FB1,afectaron en mayor medida la viabilidad de las CMB que poseen un receptor Ahr conmayor afinidad por sus ligandos.Conclusiones: Los resultados de este estudio sugieren fuertemente que el efectointeractivo de AFB1 y FB1 sobre la activación del receptor Ahr, y por subsiguiente en laactividad de CYP1A y la biotransformación de AFB1, contribuye a la inmunotoxicidad de las mezclas de ambas micotoxinas.