El hipotiroidismo congénito (HC) es una enfermedad prevalente que afecta una proporción de 1:2,181 recién nacidos en la provincia de Córdoba. La disgenesia tiroidea es responsable del 60% de los casos mientras que el 40 % presenta alteraciones en la biosíntesis o acción de las hormonas tiroideas.
El yodo es un componente esencial de las hormonas tiroideas. Dichas hormonas son importantes reguladores del metabolismo intermedio, siendo fundamentales para el desarrollo del sistema nervioso central del recién nacido. El programa de pesquisa neonatal de HC permite su rápido diagnóstico y la instauración de un tratamiento precoz evitando un daño neurológico irreversible.
Defectos en el transporte de yoduro (ITD) es un desorden autosómico recesivo poco común causante de HC debido a la incapacidad de la célula tiroidea de acumular yoduro, postulado primer paso en la biosíntesis de las hormonas tiroideas. El simportador de sodio/yoduro (NIS) es una glicoproteína integral de membrana altamente especializada en la catálisis del transporte activo de yoduro hacia el interior celular. Hasta el momento han sido caracterizadas 12 mutaciones en NIS como causa de ITD.
El objetivo del presente trabajo ha sido analizar la presencia de mutaciones en el gen de NIS en pacientes con hipotiroidismo congénito sospechados de presentar ITD.
Se estudiaron seis pacientes con HC no relacionados detectados por pesquisa neonatal. Se utilizó como criterio de inclusión valores séricos de TSH elevada y T4 disminuida, presencia ecográfica de glándula tiroidea y centellograma tiroideo (captación de 99mTcO4-) negativo o claramente dismunuído al momento de la confirmación diagnóstica. En base al criterio empleado se establecieron, un grupo con captación de 99mTcO4- menor al 1% (no captante, n=2) y un segundo grupo con valores de 1-10% (hipocaptante, n=4).
El ADN genómico fue extraído de células mononucleadas de sangre periférica, y se evaluó mediante amplificación por PCR y posterior secuenciamiento, los 15 exones que constituyen el gen de NIS, incluyendo las regiones no traducidas y uniones intrón/exón.
Se determinó la presencia de una nueva transición homocigota C-T en un paciente hipocaptante ubicada dentro de la región 5’ no traducible (5’UTR) ubicada en el exón 1, posición -54 (-54C→T). Además, se detectaron dos nuevos polimorfismos homocigotas en sendos pacientes hipocaptantes dentro de la región codante (exón 11, posición +1,673 y exón 13, posición +1,973).
Con el fin de entender las bases moleculares de la mutación descubierta se la evaluó a nivel funcional. Se construyeron vectores de expresión conteniendo la secuencia humana codificante de NIS salvaje (WT) y mutante (-54C→T), que fueron transfectadas de forma estable en la línea celular Cos-7. Notablemente, las células transfectadas con la secuencia de NIS mutada solamente concentraron 5-10% del nivel de yoduro acumulado por WT (captación de 125yoduro), sugiriendo que la mutación podría ser la causa directa de ITD. El análisis de la expresión proteica de NIS tanto en la membrana plasmática como el nivel total se observaron significativamente disminuidos en células conteniendo la mutante, mientras que las WT mostraron una abundante expresión total y adecuadamente localizada en la membrana plasmática. Sorprendentemente, los niveles de ARNm de NIS evaluados por RT/PCR en tiempo real fueron similares en las líneas celulares expresando la versión WT o -54C→T.
Estos resultados plantearon la posibilidad de que la mutación ejerza una deficiencia de la traducción. Puesto que la secuencia 5'UTR tiene un papel muy importante en la estabilidad del ARNm y eficiencia de traducción, analizamos el ARNm de NIS en el perfil polisomal aislado de nuestro sistema de células Cos-7 estables. Compatible con una traducción activa, el ARNm de NIS WT se asoció con la fracción polisomal, mientras que el proveniente de la mutante se observó significativamente reducida en polisomas, consistente con una tasa de traducción y expresión proteica reducida.
En conclusión, hemos descripto una nueva mutación en el gen de NIS (-54C → T) como posible causa de HC. La evaluación funcional del mecanismo molecular responsable de la alteración en la capacidad de concentrar yoduro indicaría que la mutación afecta la iniciación de la traducción, reduciendo dramáticamente la síntesis proteica de NIS. Además, nuestros resultados confirman la factibilidad de que alteraciones en proteínas relacionadas al plegamiento y tráfico de NIS a la membrana plasmática podrían contribuir potencialmente como causa de HC.
