NICOLA JUAN PABLO
Congresos y reuniones científicas
Título:
Rol de TLR4 en la carcinogénesis tiroidea inducida por el oncogén BRAF
Autor/es:
NAZAR, M; PEYRET, V; NICOLA, JP; QUINTAR, A; SANTISTEBAN, P; MASINI-REPISO, AM
Lugar:
Salta
Reunión:
Congreso; IX Congreso de la Federación Argentina de Sociedades de Endocrinología; 2012
Institución organizadora:
Federación Argentina de Sociedades de Endocrinología
Resumen:
Los receptores tipo Toll (TLRs) son proteínas de membrana que reconocen patrones moleculares expresados por un amplio espectro de agentes infecciosos, y estimulan una variedad de respuestas inflamatorias. La desregulación de su señalización, como así también polimorfismos y mutaciones de estas proteínas, han sido relacionadas con varios tipos de enfermedades infecciosas, inflamatorias, autoinmunes y cáncer. Dichas patologías resultarían de una inadecuada regulación negativa de la señalización mediada por los TLRs, dando origen a un microambiente con producción excesiva de citoquinas proinflamatorias.
En relación a la glándula tiroidea, se ha descripto la expresión funcional de TLR3 en tirocitos normales, y al mismo tiempo, altos niveles de expresión en carcinoma papilar tiroideo. Respecto a TLR4, ha sido demostrada su expresión en cáncer de mama, próstata, ovario, pulmón, colon y melanoma, siendo ésta asociada a una extensión
de los infiltrados inflamatorios. Recientemente nuestro grupo ha demostrado la expresión funcional del receptor TLR4 en tirocitos murinos, aunque el significado funcional de la expresión del receptor en células tumorales sigue siendo poco conocida.
Objetivo: Estudiar la participación de TLR4 en células tumorales tiroideas en relación al desarrollo y progresión del cáncer de tiroides.
Materiales y métodos: Inmunohistoquímica (IHQ), mRNA (RT-qPCR), actividad de promotores (Luciferasa, transfecciones transientes), proteínas (Western Blot, WB).
Resultados: Se evaluó la expresión proteica de TLR4 mediante IHQ en tejido tiroideo humano normal (n=15) y patológico, incluyendo procesos neoplásicos como carcinomas papilares (n=18), carcinomas foliculares (n=20), carcinomas indiferenciados o anaplásicos (n=4), y metástasis ganglionares de carcinomas papilares (n=18).
Interesantemente, se observaron niveles de expresión elevados del receptor en todos los tejidos correspondientes a procesos neoplásicos, no así en tejido normal adyacente.
En consecuencia, evaluamos la expresión de TLR4 en un sistema celular doxiciclina-inducible, en el que células tiroideas de rata, PCCL3, expresan el oncogén BRAF V600E cuando son tratadas con la droga (células PC-BRAF, sistema TET-ON). Observamos que las células expresaron TLR4 después de ser tratadas con doxiciclina, el cual resultó ser funcional debido a su capacidad de responder al tratamiento con LPS incrementando la expresión de IL-6 e iNOS. Más aún, el tratamiento con doxiciclina a diferentes tiempos reveló una incrementada expresión de TLR4 por WB. Mediante transfecciones transientes ultilizando el promotor de TLR4 acoplado a luciferasa demostramos que el incremento de la expresión proteica de TLR4 se debió en parte, a una aumentada actividad transcripcional
inducida por doxiciclina. Mediante el cultivo de células tiroideas normales con medio condicionado proveniente de células transformadas por la expresión del oncogén, se observó una incrementada expresión de TLR4, indicando la posible presencia de factores solubles involucrados en la inducción del receptor. Del mismo modo, y como ha sido descripto, la expresión del oncogén BRAF en tiroides mostró una incrementada actividad de NF-κB, principal mediador en los procesos proinflamatorios de la vía inducida por LPS a través de la activación de TLR4.
Conclusiones: Nuestros hallazgos avalan la hipótesis fundada en que procesos inflamatorios crónicos promoverían el desarrollo y progresión del cáncer de tiroides, donde una incrementada expresión de TLR4 inducida por BRAF sería responsable de sustentar un microambiente proinflamatorio propicio para la tumorigénesis en diversos tejidos.
En relación a la glándula tiroidea, se ha descripto la expresión funcional de TLR3 en tirocitos normales, y al mismo tiempo, altos niveles de expresión en carcinoma papilar tiroideo. Respecto a TLR4, ha sido demostrada su expresión en cáncer de mama, próstata, ovario, pulmón, colon y melanoma, siendo ésta asociada a una extensión
de los infiltrados inflamatorios. Recientemente nuestro grupo ha demostrado la expresión funcional del receptor TLR4 en tirocitos murinos, aunque el significado funcional de la expresión del receptor en células tumorales sigue siendo poco conocida.
Objetivo: Estudiar la participación de TLR4 en células tumorales tiroideas en relación al desarrollo y progresión del cáncer de tiroides.
Materiales y métodos: Inmunohistoquímica (IHQ), mRNA (RT-qPCR), actividad de promotores (Luciferasa, transfecciones transientes), proteínas (Western Blot, WB).
Resultados: Se evaluó la expresión proteica de TLR4 mediante IHQ en tejido tiroideo humano normal (n=15) y patológico, incluyendo procesos neoplásicos como carcinomas papilares (n=18), carcinomas foliculares (n=20), carcinomas indiferenciados o anaplásicos (n=4), y metástasis ganglionares de carcinomas papilares (n=18).
Interesantemente, se observaron niveles de expresión elevados del receptor en todos los tejidos correspondientes a procesos neoplásicos, no así en tejido normal adyacente.
En consecuencia, evaluamos la expresión de TLR4 en un sistema celular doxiciclina-inducible, en el que células tiroideas de rata, PCCL3, expresan el oncogén BRAF V600E cuando son tratadas con la droga (células PC-BRAF, sistema TET-ON). Observamos que las células expresaron TLR4 después de ser tratadas con doxiciclina, el cual resultó ser funcional debido a su capacidad de responder al tratamiento con LPS incrementando la expresión de IL-6 e iNOS. Más aún, el tratamiento con doxiciclina a diferentes tiempos reveló una incrementada expresión de TLR4 por WB. Mediante transfecciones transientes ultilizando el promotor de TLR4 acoplado a luciferasa demostramos que el incremento de la expresión proteica de TLR4 se debió en parte, a una aumentada actividad transcripcional
inducida por doxiciclina. Mediante el cultivo de células tiroideas normales con medio condicionado proveniente de células transformadas por la expresión del oncogén, se observó una incrementada expresión de TLR4, indicando la posible presencia de factores solubles involucrados en la inducción del receptor. Del mismo modo, y como ha sido descripto, la expresión del oncogén BRAF en tiroides mostró una incrementada actividad de NF-κB, principal mediador en los procesos proinflamatorios de la vía inducida por LPS a través de la activación de TLR4.
Conclusiones: Nuestros hallazgos avalan la hipótesis fundada en que procesos inflamatorios crónicos promoverían el desarrollo y progresión del cáncer de tiroides, donde una incrementada expresión de TLR4 inducida por BRAF sería responsable de sustentar un microambiente proinflamatorio propicio para la tumorigénesis en diversos tejidos.
